التلازن الدموي

التلازن الدموي وتثبيط التلازن الدموي
Hemagglutination & Hemagglutination inhibition test .
يعتبر اختبار التلازن الدموي من الاختبارات المصلية التي تستعمل لتشخيص الفيروسات حيث ان لبعض الفيروسات القابلية على تلزين كريات الدم الحمراء لعدد من الحيوانات.
تحضير عالق كريات الدم الحمراء:-
1- يؤخذ الدم من بعض الحيوانات مثل خنزير غينيا او الطيور بواسطة سحب الدم من القلب ويخلط مع محلول ألسيفر (Alsever?s solution) او الهيبارين لمنع تخثره.
2- تغسل كريات الدم الحمراء ثلاث مرات بواسطة Phosphate Buffer Solution (PBS) ويحضر10 % كخزين ,يحفظ في 4 م? لمدة لاتزيد عن الاسبوع.
3- يعمل 0.5 % عالق كريات الدم الحمراء باضافة 1 مل من الخزين (10 %)الى 19 مل من (PBS)قبل الاستعمال مباشرة.


معايرة الملزن الدموي Titration of Hemagglutination
يتم اختبار الوسط الزرعي الحاوي على الخلايا المصابة والتي تظهر امتزازا دمويا ويمكن ان تحتوي على الملزن الدموي الفايروسي وكالاتي:
1. باستعمال سائل الزرع النسيجي المصاب او سوائل البيضة المصابة يتم تحضير تخافيف ثنائية (1:10 الى 1:640) باستعمال (PBS) ويتم وضع حجم 0.05 لكل تخفيف في طبق المعايرة (Microtiter plate)يتم زيادة الحجم إذا تمت المعايرة في اطباق ذات حفر أكبر حجما.
2. نضيف 0.05 مل من عالق كريات الدم الحمراء 0.5لكل تخفيف في اعلاه ويترك الطبق لمدة ساعة الى ساعتين للسماح لكريات الدم الحمراء بالاستقرار.
3. يقرأ المعيار من خلال تحديد التخفيف الاعلى للعالق الفيروسي الذي يستطيع إحداث تلازن دموي كلي او جزيئي.

ملاحظة: ان تلازن كريات الدم الحمراء بوجود myxovirus ناتج عن امتزاز الملزن الدموي الفيروسي للمستقبلات البروتينية السكرية والموجودة على أسطح كريات الدم الحمراء ,حيث يمكن الحصول على جزيئات الفيروس في هذه الحالة وفصلها عن كريات الدم الحمراء بواسطة حضنها لفترة اطول بدرجة حرارة الغرف 37 م ? بسبب وجود انزيم Neuraminidase في هذا النوع من الفيروسات الذي يحطم المستقبلات. اما الفيروسات الاخرى التي لا تمتلك هذا الانزيم مثل الفيروسات المعوية فلا يمكن عزلها بالتلازن الدموي.



النتيجة سالبة للفحص النتيجة الموجبة
اختبار تثبيط التلازن الدموي Hemagglutination inhibition test
يعتمد اختبار تثبيط التلازن الدمويHI على تثبيط التلازن الفيروسي بواسطة الاجسام المضادة المتخصصة في المصل وهو اختبار يستعمل في التشخيص الفايروسي واختبارات الاجسام المضادة ويجري الاختبار كالاتي:
1. تحدد وحدات الملزن الدموي الفايروسي (كما في المثال السابق)
2. تعمل تخافيف ثنائية للمصل.(الاجسام المضادة المتخصصة)بمحلول PBSمن 1:10 الى 1:640 ويوضع حجم 0.025 مل في كل حفرة.
3. يضاف حجم 0.025 مل من التخفيف الفيروسي الذي يحتوي على اربعة وحدات (HA)لكل من التخافيف المصلية.
4. يخلط المحلول جيدا ويترك لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة .
5. يضاف حجم 0.025 مل من عالق كريات الدم الحمراء ذات التركيز 0.5%لكل حفرة ونتركها لمدة ساعة الى ساعتين بدرجة 4م? او 22م? .
6. نقرأ العيار المصلي وهو مقلوب اعلى تخفيف من المصل يثبط التلازن الدموي الفيروسي .





Alsever?s solution

Dextrose 20.5
Sodium citrate 8.0
Citric acid o.55
Nacl 4.2 gm
Distillednwater 1000 ml